COLTURA DI CELLULE

Possovedere come funzionano i geni,i recettori,lo smistamento di sostanze nelle cellule.

Si possono fare anche analisi su cellule modificate,la tossicità di sostanze,riducendo il bisogno di usare animali interi per lo studio.

Ci sono terapie avanzate per cotivare cellule in coltura per fare operazioni terapeutiche.

Vantaggi di coltura d'organo

-mantiene la connesione tra cellule

-Ci sono linee cellulari continue,si possono conservare e moltiplicare a piacimento.

Date le condizioni ideali di coltura le cellule si moltipolicano fino ad arrestare la mitosi e si ha la SENESCENZA (=morte della coltura cellulare) perché non ci sono più enzimi specifici.

In poche colture certe cellule continuano a proliferare allk'infinito e danno origine alla linea cellulare CONTINUA.Sto fenomeno è detto IMMORTALIZZAZIONE.

All'inizio si pensava fossro solo cellule tumorali (= perdita de controllo sulla proliferazione).Molte però non sono tumorali.

La cellula normale cresce e regola la crescita ,questa è regolata dal contatto con le cellule vicine.

Le cellule tumorali continuano a proliferare quando non hanno più spazio a disposizione.

La maggior parte delle cellule cresce aderendo a superficie solida,crescono attaccate al recipiente cojn un liquido sopra,tranne quelle del sangue che crescono libere.

C'è un test :prendo una linea cellulare di topo e la inoculo in un altro topo dello stesso ceppo,questese sono tumorali crescono incontrollatamente dando un amassa tumorale.

Per le cellule umane si usano due test diversi:

! Inoculo cellule di un animale in un altro di diversa specie senza sistema immunitario (altrimenti se lo avesse ci sarebbe un rigetto).Perciò sti topi sono ospiti delle cellule di altri animali e se vedo che la cellula prolifera incontrollatamente essa è tumorale.

Le cellule metastatiche crescono senza avere contatto con le cellule attorno.In coltura le faccio crescere con l'Agar(sostanza ricavata dalle alghe,perciò estranea ai tessuti e le cellule non hanno recettori per l'Agar e perciò non si agganciano da nessuna parte). Osservo le colonie nell'Agar (questo è il test in vitro per saggiare la malignità di una cellula.

Le cellule in coltura non sono mai diploidi son 2n-3n (ANEUPLOIDIA).

EUPLOIDIA = corredo genetico

ANEUPLOIDIA = mancanza di un corredo genetico

ETEROPLOIDIA= le cellule non hanno lo stesso numero di cromosomi.

STERILITA'

Per essere sterile nelle colture ci devono essere solo le cellule che mi interessano.

L'autoclave serve per la sterilizzazione.

La plastica è sterilizzata con raggi gamma perché altrimenti si fonderebbe.

Ciò vale anche per le pipette.

Le cellule devono però vivere con l'atmosfera,e per non inquinqrle con batteri uso un recipiente come quello utilizzato das Pasteur per il suo esperimento:col beccuccio ripiegato.

Ci sono incubatori che mantengono la temperatura costante a 37°C (per i mammiferi).

Il fonda è pieno di acqua per mantenere l'umidità.

Negli incubatori l'atmosfera è al 90% normale e 5% di CO2.

C'e un frigo per conservare i terreni di coltura.

C'è la cappa sterile:aspira l'aria e la fa circolare sul retro e la soffia attraaverso un filtro sterile e la butta sull'area di lavoro.

I nutrienti per le cellule sono l'acqua,Amminoacidi,vitamine,sali(per dare la pressione osmotica,tamponi di bicarbonati,glucosio,streptomicina e penicillina,rosso fenolo (=indicatore di pH) serve perché i prodotti del catabolismo inacidiscono il terreno,per es.l'acido lattico,vuol dire che ci sono troppe cellule,o hanno poco mangiare oppure ci sono batteri o lieviti.Se il terreno è anche torbido sono batteri.

Siero = componente liquida del sangue di feto di bovino che fornisce sostanze utili per le cellule (per es ormoni).Ci sono ora terreni senza siero ma con determinate seostanze.